公共场所集中空调系统冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检验方法 |
冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检验方法
本附录规定了集中空调通风系统冷却水、冷凝水及其形成的沉积物、软泥等样品中嗜肺军团菌（fungus)的检验方法。
A1原理
待测水样经过滤膜或离心浓缩后，一部分样品经酸处理(chǔ lǐ)与热处理，以最大化减少杂菌（fungus)生长，一部分样品不作处理。将上述处理与未处理样品分别接种BCYE琼脂平板并进行培养，生成典型菌落并经生化培养和血清学实验鉴定(同义词:判定、判断、判决)确认则判定为嗜肺军团菌。
A2 主要仪器设备
A2.1 平皿：90mm
A2.2 培养箱：35~37℃
A2.3 紫外灯：波长360±2nm
A2.4 滤膜滤器
A2.5 滤膜：孔径(aperture)0.22～0.45μm
A2.6 蠕动(wriggle)泵
A2.7 离心机
A2.8 涡旋振荡器
A2.9 普通光学显微镜、荧光显微镜、体式镜
A2.10 水浴箱
A3 采样
A3.1 采样容器：可选择玻璃瓶或聚乙烯瓶，沉积物与软泥需用广口瓶，容器均需螺口或磨口，用前灭菌（fungus)。
A3.2 采样量：每个采样点依无菌操作取水样约200ml。
A3.3 中和：经氯或臭氧等消毒的样品，采样容器灭菌（fungus)前加入硫代硫酸钠溶液以中和样品中的氧化物。
A3.4 样品运输与贮存：样品最好2天内送达实验室，不必冷冻，但要避光和防止受热，室温下贮存不得超过15天。
A4 方法与步骤
A4.1 样品处理
A4.1.1 沉淀或离心：如有杂质可静置沉淀或1000r/min离心1min筛除。泰州空气检测新装修或新进家具的房子尽量通风。检测时，对采用自然通风的民用建筑，门窗关闭1小时后进行检测，“氡气”则应在对外门窗关闭1小时后进行检测；对采用中央空调的，应在空调正常运转的条件下进行检测。
A4.1.2 过滤：将经沉淀或离心的样品通过孔径0.22～0.45μm滤膜过滤，取下滤膜置于15ml灭菌水中，充分洗脱，备用。
A4.1.3 热处理：取1ml洗脱样品置50℃水浴加热30min。泰州空气检测新装修或新进家具的房子尽量通风。检测时，对采用自然通风的民用建筑，门窗关闭1小时后进行检测，“氡气”则应在对外门窗关闭1小时后进行检测；对采用中央空调的，应在空调正常运转的条件下进行检测。
A4.1.4 酸处理(chǔ lǐ)：取5ml洗脱样品，调pH至2.2，轻轻摇匀，放置5min。
A4.2 接种与培养：取A4.1.2洗脱样品、A4.1.3 热处理样品及A4.1.4酸处理样品各0.1ml，分别接种GVPC平板。将接种平板静置于CO2培养箱中，温度为35~37℃，CO2浓度为2.5%。无CO2培养箱可采用烛缸培养法。观察到有培养物生成时，反转平板，孵育10天，注意保湿。
A4.3观察结果：军团菌生长缓慢，易被其它菌掩盖，需每天在体式镜上观察。军团菌的菌落颜色多样，通常呈白色、灰色、蓝色或紫色，也能显深褐色、灰绿色、深红色;菌落整齐，表面光滑，呈典型毛玻璃状，在紫外灯下，有荧光。
A4.4菌落验证：从每一个平皿上挑取2个可疑菌落，接种BCYE和L-半光氨（化学式：NH3） 酸缺失的BCYE琼脂平板，35~37℃培养2天，凡在BCYE琼脂平板上生长而在L-半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板不生长的则为军团菌菌落。泰州甲醛检测操作简单、使用方便的简易检测方法的产品，也是目前最适合个人家庭检测甲醛的检测方法。体积小巧方 便放置，用于家具治理前后对比甲醛浓度，判断治理效果再方便合适不过啦！甲醛自测盒的最大特点就是消费者可以自己动手检测甲醛，操作方法简单！
A4.5嗜肺军团菌型别的确定：应进行生化培养与血清学实验确定嗜肺军团菌。生化培养：氧(Oxygen)化酶，硝酸盐还原-，尿素酶-，明胶液化+，水解马尿酸(Uric acid)。血清学实验：用嗜肺军团菌诊断(diagnosis)血清进行分型。
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